Marahil ay nais mong magtanyag ng isang protina para sa isang proyekto sa agham, o marahil ay nabasa mo ang tungkol sa denatured na pagkain at nais mong malaman kung paano ito gumagana. Ang Denaturation ay ang proseso kung saan mawawalan ng hugis at istraktura ang isang protina dahil sa mga pagkilos mula sa panlabas na pwersa, kabilang ang init, radiation, acid, at solvents. Organic solvents karaniwang denatur protina. Ang eksaktong paraan ng pagtanggi mo ng isang protina ay nakasalalay sa partikular na isa na nais mong gumana, dahil lahat sila ay nangangailangan ng iba't ibang mga ahente ng denaturing sa iba't ibang antas. Karamihan sa anumang protina ay maaaring maitampok, kung alam mo kung ano ang babaguhin sa kapaligiran ng protina.
Mga hakbang
Paraan 1 ng 2: Denaturing a Protein
Hakbang 1. Gumamit ng init
Ang init ay isa sa pinakamadaling paraan at pinakakaraniwang paraan upang maipakita ang isang protina. Kapag ang pinag-uusapang protina ay naroroon sa pagkain, ang simpleng pagluluto lamang ng pagkain ay magpapahiwatig ng mga protina. Maraming mga protina ang maaaring maitampok sa pamamagitan ng paglantad sa kanila sa isang temperatura ng o higit sa 100 ° C (212 ° F). Pinapayagan nitong protektahin ang mga protina at bawasan ang kanilang solubility.
Ang haba ng pagkakalantad ay nakasalalay sa kung ano ang inilalantad mo sa init. Ang isang itlog, halimbawa, ay maaaring magluto sa isang kawali sa katamtamang init sa loob ng limang minuto, habang ang isang inihaw ay maaaring tumagal ng maraming oras upang magluto sa isang oven
Hakbang 2. Maglagay ng alkohol
Ang alkohol ay nakakagambala sa mga bond ng hydrogen na nagaganap sa pagitan ng mga pangkat ng amide ng isang bond ng peptide. Kapag ang isang protina ay nahantad sa isang solusyon sa alkohol, ang mga molekula ng alkohol ay bumubuo ng mga bagong bono na may kadena ng protina. Gumamit ng isang solusyon ng 70% alak upang masagasaan ang cell wall ng bakterya at maitaguyod ang protina.
Ang mga naka-concentrate na alkohol ay maaaring mapanganib, dahil pareho silang nasusunog at nakakalason. Laging magsuot ng buong kagamitang pangkaligtasan kabilang ang guwantes at proteksyon sa mata, at hawakan sa isang ligtas, kontroladong temperatura na kapaligiran
Hakbang 3. Baguhin ang pH
Ang panloob na istraktura ng isang protina ay maaaring masira kapag ang kapaligiran nito ay napaka-acidic o napaka alkalina, dahil ginugulo nila ang mga ionic bond na magkakasama sa mga tulay ng asin ng protina. Magdagdag ng isang acid o base solution sa protina. Ang nakapaligid na kapaligiran ay dapat na nasa isang ph na higit sa 10 o mas mababa sa 4 upang hikayatin ang denaturation. Kung iyong hinihimok ang pagbabago sa acid, ang ph ay dapat nasa pagitan ng 2 at 5.
Ang pagbabago ng ph ay maaaring mag-ionize ng isang amino acid, depende sa pKa ng bawat gumaganang pangkat sa amino acid na iyon. Maaari mo ring mai-ionize ang pangkat na amino o grupo ng carboxyl na naroroon sa amino acid
Hakbang 4. Subukan ang mga mabibigat na asing-gamot ng metal
Ang mga mabibigat na metal ay maaaring makagambala sa mga bono sa protina, na sanhi na mawala ang istraktura nito. Ang mga asing-gamot ng mabibigat na riles tulad ng mercury at tingga ay maaaring magamit upang maipakita ang iba't ibang mga protina. Ang mga nasabing asing-gamot ay magagamit mula sa karamihan sa mga tagatustos ng kemikal, at dapat palaging magamit nang may pag-iingat at wastong kagamitan sa kaligtasan kabilang ang guwantes at proteksyon sa mata.
Ang mga mabibigat na riles ay maaaring makipag-ugnay sa mga functional group chain ng isang protina upang mabuo ang mga kumplikado. Ang mga mabibigat na metal din ay nag-e-oxidize ng mga chain ng amino acid na bahagi ng protina
Paraan 2 ng 2: Renaturing Proteins
Hakbang 1. Tukuyin kung maaaring mag-refold ang isang protina
Ang ilang mga anyo ng denaturation ay permanente, habang ang iba ay maaaring mabawi. Ang pagluluto ng itlog o karne, halimbawa, ay hindi maaring mabawi, ngunit ang isang protina na nakalantad sa isang mataas na pH ay maaaring mabawi ang hugis kapag inilagay sa isang mas walang kinikilingan na kapaligiran.
Kung ang refined protein ay maaaring refold ay depende sa DNA nito. Hawak ng DNA ang impormasyong kinakailangan upang bumalik ang protina sa kanyang katutubong estado
Hakbang 2. Alisin ang denaturing factor
Ibalik ang kapaligiran sa paligid ng protina sa stasis at alisin ang elemento ng denaturing. Alisin ang acid o base, halimbawa, o ibalik ang protina sa isang mas makatuwirang temperatura.
Hakbang 3. Gumamit ng isang renaturation kit
Maraming mga kumpanya ng mga supply ng laboratoryo ang nagbebenta ng mga kit ng renaturation na nagpapahintulot sa iyo na mag-screen para sa pinakamahusay na mga parameter upang hikayatin ang muling pagkabuo. Ang mga nasabing kit ay maaaring maging kapaki-pakinabang lalo na kung tinitingnan mo ang mga protina sa isang laboratoryo o pang-eksperimentong setting.
Mga Tip
- Ang isang denatured na protina ay nawawala ang quarternary, tertiary, at pangalawang istraktura na maliwanag sa kanyang katutubong estado, ngunit ang pangunahing istraktura nito ay mananatili.
- Ang isang denatured protein ay nawawala rin ang ilan sa bioactivity nito, sa ilang mga kaso, tulad ng mga enzyme, nawawalan ng kakayahang gumana. Halimbawa, ang mga substrates ay maaaring hindi na makapag-bond sa mga enzyme na na-denatured.
- Ang denatured protein ay maaaring mawala ang solubility nito sa isang solusyon.
- Maaari mo ring tukuyin ang mga nucleic acid na gumagamit ng mga diskarte sa laboratoryo upang paghiwalayin ang mga hibla.
